Magnetiliste vere laikude DNA komplekt

A-1 Rakkude või viiruse madal kontsentratsioon lähteproovis-rikastage rakkude või viiruste kontsentratsiooni.

A-2 Proovide ebapiisav lüüs-Proove ei ole lüüsipuhvriga põhjalikult segatud. Soovitatav on 1-2 korda impulsskeerisega põhjalikult segada. - ebapiisav rakkude lüüs, mis on põhjustatud proteinaas K aktiivsuse vähenemisest; - ebapiisav rakkude lüüs või valkude lagunemine ebapiisava sooja vanni aja tõttu. Lüsaadis olevate jääkide eemaldamiseks soovitatakse koe lõigata väikesteks tükkideks ja vanni aega pikendada.

A-3 Ebapiisav DNA adsorptsioon. -Enne lüsaadi tsentrifuugimiskolonni viimist ei lisatud 100% etanooli asemel etanooli või madalat protsenti.

A-4 Elueerimispuhvri pH väärtus on liiga madal. -Reguleerige pH vahemikku 8,0-8,3.

Etanooli jääk eluendis.

—Eluentis on pesupuhvri jääk PW. Etanooli saab eemaldada tsentrifuugides tsentrifuugimiskolonni 3-5 minutit ja seejärel asetades toatemperatuurile või 50 ° C inkubaatorisse 1-2 minutiks.

A-1 Proov ei ole värske. —Ekstraheerige positiivse proovi DNA kontrollina, et teha kindlaks, kas proovi DNA on lagunenud.

A-2 Ebaõige eeltöötlus. - Põhjuseks liigne vedela lämmastiku jahvatamine, niiskuse taastumine või liiga suur kogus proovi.

Eeltöötlus peaks erinevate proovide puhul olema erinev. Taimeproovide puhul jahvatage kindlasti vedelas lämmastikus. Loomaproovide puhul homogeenitakse või jahvatatakse põhjalikult vedelas lämmastikus. Proovide puhul, mille rakuseinad on raskesti murduvad, näiteks G+ bakterid ja pärm, soovitatakse rakuseinte purustamiseks kasutada lüsosüümi, lüütaasi või mehaanilisi meetodeid.

4992201/4992202 Taimede genoomse DNA komplekt võtab kasutusele veerupõhise meetodi, mille ekstraheerimiseks on vaja kloroformi. See sobib eriti hästi erinevate taimede proovide, aga ka taimede kuivpulbri jaoks. Hi-DNAsecure Plant Kit on samuti veerupõhine, kuid ei vaja fenooli/kloroformi ekstraheerimist, muutes selle ohutuks ja mittetoksiliseks. See sobib kõrge polüsahhariidide ja polüfenoolisisaldusega taimedele. 4992709/4992710 DNAquick Plant System kasutab vedelikul põhinevat meetodit. Fenooli/kloroformi ekstraheerimine pole samuti vajalik. Puhastusprotseduur on lihtne ja kiire, ilma proovi stardikogustele piiranguteta, nii et kasutajad saavad kogust paindlikult vastavalt katsenõuetele reguleerida. Suure saagisega on võimalik saada suuri gDNA fragmentide suurusi.

Genoomne DNA ekstraheeriti TIANamp vere DNA komplektiga erinevatest kogustest inimese täisvereproovidest. Tulemused on järgmised. Tulemused on loetletud ainult viitena, tegelikud ekstraheerimistulemused sõltuvad proovide tingimustest.

Verehüübe DNA ekstraheerimist saab teostada nende kahe komplektiga kaasas olevate reagentide abil, muutes lihtsalt protokolli verehüübe DNA ekstraheerimise konkreetseks juhiseks. Soovi korral saab väljastada verehüübe DNA ekstraheerimise protokolli pehme koopia.

Suspendeerige värske proov 1 ml PBS -i, tavalise soolalahuse või TE -puhvriga. Proov homogeenige täielikult homogenisaatoriga ja koguge sade tsentrifuugimisega toru põhja. Visake supernatant ära ja suspendeerige sade uuesti 200 μl puhverlahusega GA. Järgnevat DNA puhastamist saab läbi viia vastavalt juhistele.

Plasma, seerumi ja kehavedeliku proovide gDNA puhastamiseks on soovitatav kasutada TIANamp Micro DNA komplekti. Viiruse gDNA puhastamiseks seerumi/plasma proovidest on soovitatav kasutada TIANamp viiruse DNA/RNA komplekti. Bakteriaalse gDNA puhastamiseks seerumi- ja plasmaproovidest on soovitatav kasutada TIANamp Bacteria DNA Kit komplekti (positiivsete bakterite korral tuleks lisada lüsosüüm). Süljeproovide jaoks on soovitatav kasutada Hi-Swab DNA Kit ja TIANamp Bacteria DNA Kit.

Seente genoomi ekstraheerimiseks on soovitatav kasutada DNAsecure Plant Kit või DNAquick Plant System. Pärmi genoomi ekstraheerimiseks on soovitatav kasutada TIANamp pärmi DNA komplekti (lüütaas tuleks ise valmistada).